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難溶肽純化技術

      在我們多肽生產純化過程中,經常會遇到難溶的序列,這導致了眾多多肽公司多肽成產過程中收率低,難純化,成品純度不合格甚至多肽生產失敗等后果,這種難溶性與多肽自身的氨基酸組成及序列有密切關系,我們在多肽領域內長期深入的研究,讓我們積累了大量的寶貴經驗,保證我對于難溶肽的溶解純化保持很高的成功率和產品質量。
      我們對于難溶肽的溶解總結出以下幾點:

(1)

通常整體顯酸性的多肽溶解困難時可以加入適量的堿性溶液,而顯堿性的多肽溶解困難時可以加入適量的酸性溶液;。

(2)

序列中含有大量疏水性氨基酸或中性氨基酸時,難于直接溶于水,通常需要先加入少量有機溶劑,溶解完全后用蒸餾水大量稀釋,常用的有機溶劑有乙腈,DMSO,DMF,丙醇,異丙醇等;

(3)

當肽鏈中含有Met或者Cys時,不能用DMSO溶解,因為DMSO有氧化性,這很可能會導致肽鏈中含有的S被氧化;

(4)

專肽專柱:我們在開發Amyloid系列產品的過程中,發現用DMOS溶解的產品純化后使用的純化柱基本就不能用于其他產品的純化,為了保證Amyloid產品的穩定,我們對于Amyloid等類似產品都配用了專門的純化柱。


      在不影響您實驗需求的情況下,也可以針對肽鏈的物理性質,化學性質和分子結構,對多肽進行修飾改變,增加其溶解性,以下是我們的建議:

(1)

修飾肽鏈中C端和N端:對于酸性肽,我們推薦C端乙?;揎?對于堿性肽,我們推薦N端氨基化修飾;

(2)

修改肽鏈中的氨基酸序列:某些序列存在大量的連續的疏水性氨基酸,例如W, F, V,I, L, M, Y ,這些疏水氨基酸在序列中大量或者連續重復出現時,整條肽鏈通常是難溶的,為了增強肽的極性和親水性,我們建議客戶在不影響實驗結果的基礎上,延長序列,或者通過減少疏水性氨基酸的個數來增加溶解性。

(3)

替換序列中疏水性氨基酸的殘基:在不影響實驗結果的基礎上,用可溶性的氨基酸替代序列中的疏水性氨基酸可以達到增加溶解度的效果。我們通常用Gly, Ala來替換疏水性氨基酸,一般都會取得比較好的溶解效果,這也是一種保守但有效的增強多肽溶解度的方法。

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